HPLC E UPLC: Fundamentos e Aplicações aula 2:
08:24- o computador se comunica com o HPLC, esse computador não pode ser usado para outras funções que não seja HPLC.
14:00- nunca esquecer de trocar a garrafa de descarte do HPLC.
20:10- as bandejas dos eluentes geralmente fica em cima do HPLC.
27:56- cromatografia em módulos
27:58- eluentes
29:53- cuidados a tomar com os eluentes:
Não lavar a garrafa do eluentecom detergente.
Lavar a garrafa do eluente apenas com água
31:36- lavar garrafa do eluentes com detergente afetará o resultado analitico do HPLC/UPLC. pois as moléculas do detergente pode ser encontrado na garrafa do eluente.
38:05- recomendável usar HPLC com bomba quaternária.
46:40- a absorção UV do Eluente é proporcional a sua concentração.
50:00 a área do analito cromatografico é proporcional a sua concentração.
55:52- é necessario no eluente remover as particula de material utilizado nas garrafas.
1:07:02- é essencial realizar o banho de ultrassom com um sistema a vácuo para eliminar bolhas, e evitar ruido no cromatográfo.
1:16:57- é importante toda vez que for realizar análise da amostra, trocar a garrafa do eluente.
1:24:00- por fim realizar a purga de todas as linhas do cromatográfo.
1:25:41- fica atento nos mínimos detalhes ao realizar limpeza do cromatográfo.
Degaseificação
1:35:36- a degaseificação é composta por uma bomba de vácuo.
1:37:45 cuidados para tomar com o degaseificador:
1- não deixar água parada criando micro-organismos.
2- não deixar fase movél com tampão, ou aditivos ácidos e básicos com equipamento parado.
3-sempre que possível preencher com isopropanol todas as linhas com fins de lubrificação das tubulações e conexões.
4- Nunca passar solvente orgânico sem a certeza de que o sistema está livre de sais que possam precipitar.
5- preencher todas as linhas do eluentes mesmo que não vá utilizar todas.
• Bomba:
2:01:00- a bomba do eluente deve ter:
1-menor volume morto.
2- seleção de eluentes eficientes.
3- mistura perfeita dos eluentes.
4- Bombeamento contínuo.
5- Viscosidade dos eluentes.
6- Fluxo para descarte ou análise.
2:04:00- é essencial realizar correções no volume morto.
2:08:24- MCGV- válvula seletora de eluentes.
2:12:00- ao utilizar as linhas A e B da válvula seletora, as linhas C e D devem estar preenchida para fazer pressão.
2:14:00- misturador de eluentes: local onde a mistura química.
2:16:25 cabeça da bomba (pump head): o Bombeamento funciona como uma seringa que puxa e empurra o eluente impulsionando pela sequência do equipamento.
Check Valv: responsavel por controlar a entrada e saida do eluente presente na cabeça da bomba.
2:26:43- Viscosidade dos eluentes é composto pelos pistão A,B,C,D que são:
A- eluente: água.
B- eluente: Metanol.
C- Eluente: acetonitrila.
D- Eluente: THF
2:28:09- Válvula de Purga/ Válvula de descarte.
2:32:00- não apertar demais a válvula de Purga.
2:36:00- amostrador/Injetor:
2:44:00- é essencial colocar os frascos na posição certa para que as agulhas não seja danificada.
2:42:00- a purga do injetor realiza pressão no eluente do amostrador.
2:51:00- é essencial furar o cepto para que a agulha não seja danificada.
2:52:50- Coluna:
2:55:00- tem como função controlar a temperatura do eluente. É dividido em 2 tipos: forno e termostatizador.
• forno: tem como função aquecer o eluente em uma temperatura superior a 5 °C.
• Termostatizador: tem como função controlar a temperatura do eluente.
2:56:00- Detector:
2:57:14 espectofotometria UV/VIS: trata- se de uma técnica no qual um cumprimento de onda (luz) entre 190nm e 600nm é inserido no analito, verificando a resposta pela absorção destes cumprimentos de onda pela molécula.
2:59:00- para que absorção da luz ocorra, a cor do eluente deve ser transparente.
3:04:00- quando uma molécula absorve luz em determinado cumprimento de onda, ela está absorvendo energia.
3:04:30- cumprimento de onda baixo= absorção de energia alta.
° cumprimento de onda alto= absorção de energia baixo.
3:08:45- quanto maior a conjugação de energia elétrica, maior será absorção de energia UV.
3:19:30- quanto mais eletróns existem em um eluente, maior será seu cumprimento de onda.